Osservazione di batteri

Con questa semplice procedura è possibile osservare i Bacillus Clausii presenti nell'enterogermina.

MATERIALE NECESSARIO:

-fucsina fenica :tossico:

-tintura di iodio :irritante:

-etanolo 95° :infiammabile:

-vetrino copri e porta-oggetti

PROCEDIMENTO:

Si prelevano 0,2ml di enterogermina e si pongono su un vetrino portaoggetti. Si scalda il vetrino con un accendino (muovendolo rapidamente per evitare che si spacchi) per fissare i batteri.

Si procede con la colorazione ponendo alcune gocce di fucsina fenica sul preparato per 2 minuti, successivamente si lava con etanolo fino a quando non scolora più.

Si lascia asciugare e si pongono 2-3 gocce di tintura di iodio per 1 minuto, si lava con etanolo e si lascia asciugare.

Infine si pongono ancora alcune gocce di fucsina fenica per 5 min, dopodichè si lava con etanolo, acqua corrente e di nuovo con etanolo.

Si lascia asciugare e si osserva al microscopio

Questa è a 100 ingrandimenti

Questa è a 1000

negli ingrandimenti tieni conto dell'oculare, quindi 10x10 e 100x10??

NaClO3 ha scritto:

negli ingrandimenti tieni conto dell'oculare, quindi 10x10 e 100x10??

Già l'oculare è di 10x

non saprei, noi lo diamo per ovvio, esplicitiamo soltanto l'obiettivo.

a parte che con i gram-positivi ti conviene usare il cristal violetto, devo ammettere di non aver sentito di questa colorazione O.O Sembra un mix molto arrabattato fra Gram e Zieh-Nielsen! I Bacillus sono gram +, quindi nella colorazione di gram verrebbero colorati in blu/violetto, mentre non vedo l'utilità di usare la Zieh-Nielsen su batteri non certo acido-alcool resistenti! Spiegami, son curioso, come mai hai usato questo metodo?

Beefcotto87 ha scritto:

Spiegami, son curioso, come mai hai usato questo metodo?

Avevo letto di questa colorazione (gram) su un pdf che avevo sul computer, solo che inizialmente diceva di usare cristal-violetto poi Lugol e infine fucsina fenica. Non avendo il cristal violetto ho pensato che avrebbe funzionato anche con fucsina fenica essendo un colorante basico anche se la colorazione è meno evidente

Di solito per la Gram, se non mi sbaglio, si usa o fucsina normale o safranina, e dopo il Lugol segue decolorazione con opportuno solvente (solitamente etanolo). Correggimi Beef se vado errato

la colorazione di Gram è una colorazione "selettiva", essa

dipende dal tipo e dallo spessore della parete cellulare che possiedono i batteri colorati, se manca un solo componente della miscela colorante, la colorazione non si regge.

Infatti, quella che hai fatto tu non è una colorazione di Gram (peraltro l'uso del lugol deve essere antecedente all'uso della fuchsina), è si e no una colorazione semplice a base di fuchsina XD che hai anche decolorato!

Beefcotto87 ha scritto:

peraltro l'uso del lugol deve essere antecedente all'uso della fuchsina

Qui dice che si colora prima con cristalvioletto, e poi si mette il lugol e la safranina http://www.ipiagalileibz.it/microbilandia3/colorazione_di_gram.htm Per quanto riguarda la colorazione di gram volevo vedere se funzionava anche con fucsina, ma mi sa che è ora che mi compro il cristalvioletto

Orrore...

il tuo lavoro è un mix di orrori...

1) la colorazione che descrivi non è la colorazione di Gram (come ti è già stato detto);

2) nella Gram non si usa tintura di iodio ma liquido di Lugol;

3) non si usa fucsina fenicata, ma safranina o al massimo fucsina basica.

Inoltre nell'enterogermina NON ci sono batteri, ma le spore.

Le spore richiedono una colorazione specifica, con la fucsina fenicata si "sporcano" un po', ma non si colorano.

Dott.MorenoZolghetti ha scritto:

Orrore...

il tuo lavoro è un mix di orrori...

Lo so è che non sono molto pratico di microscopia

Nessuno è pratico, quando inizia una nuova attività...

quindi non ti preoccupare.

Il reattivo di Lugol è facilissimo da produrre,è una soluzione di iodio elementare e ioduro di potassio in acqua,non in etanolo come la tintura di iodio

AgNO3 ha scritto:

Il reattivo di Lugol è facilissimo da produrre,è una soluzione di iodio elementare e ioduro di potassio in acqua,non in etanolo come la tintura di iodio

Si possiedo il reattivo di lugol, solo che mi pareva un po' troppo chiaro, quindi ho deciso di usare la tinture.

Ma a quali conseguenze porta questa scelta al livello della colorazione?

L'etanolo della tintura lava via parte del colore. Nel Lugol non c'è alcol.

Ma alla fine della colorazione di gram non si lava il preparato con etanolo?

Sì, appunto: alla fine della mordenzatura con lo iodio, e NON durante tale operazione!

Il passaggio finale poi è la controcolorazione con rosso (safranina o fucsina).